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[求助]
關(guān)于刪除編碼序列中ER 的HDEL作用 已有1人參與
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| 最近讀了一篇文章，文中在煙草葉片中進(jìn)行亞細(xì)胞共定位時(shí)，作者把內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的hdel刪除了，接著做了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光蛋白定位 ， 我很想知道刪除hdel這一步是為什么， 是不是hdel會(huì)對(duì)含有信號(hào)肽的定位產(chǎn)生影響？ |
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starseacow
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長(zhǎng)春花細(xì)胞中的HSP90，換了新筆記本，鍵盤(pán)用的非常不習(xí)慣。 HSP90的那個(gè)序列可以視作為一種信號(hào)肽。 PM轉(zhuǎn)運(yùn)途徑即由細(xì)胞生物合成與分泌途徑，主要從ER去往細(xì)胞膜。另外的途徑就是細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和液泡轉(zhuǎn)運(yùn)。 高爾基體的亞細(xì)胞定位可以用一些特定的蛋白用來(lái)標(biāo)記，比如擬南芥中的 Glycosyltransferase 以及1,2 α-mannosidase ，連上熒光蛋白,35S啟動(dòng)子控制下就可以定位表達(dá)。 不過(guò)我認(rèn)為一般把目的基因連熒光蛋白再和標(biāo)記共定位比較這種方法不是很靠譜，王道還是有條件的情況下做亞細(xì)胞組份的western。 |
4樓2016-11-21 03:12:36
starseacow
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
_Unicorn: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-11-20 20:59:01
kuaile5420: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-11-23 20:51:13
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回答這個(gè)問(wèn)題，你需要了解的是為什么在熒光蛋白上連接HDEL。 首先，熒光蛋白如GFP本身，在細(xì)胞中表達(dá)會(huì)顯示彌散在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，沒(méi)有特定表達(dá)位置。為了讓熒光蛋白位于特定亞細(xì)胞位置，借鑒動(dòng)物細(xì)胞研究的方法，首先在GFP上連接來(lái)自馬鈴薯塊莖儲(chǔ)存蛋白上的一個(gè)23個(gè)氨基酸長(zhǎng)肽段 patatin使得GFP會(huì)被導(dǎo)向ER。接下來(lái)為了讓 patatin-GFP能夠一直留在ER內(nèi)，又將KDEL及長(zhǎng)春HSP90同系蛋白C端的七個(gè)氨基酸連在GFP的C端，這樣形成的patatin-GFP-KDEL將一直在ER中。HDEL起類(lèi)似作用。 一般來(lái)說(shuō)刪去HDEL，主要是在traffic研究中。patatin-GFP會(huì)從ER通過(guò)指向PM的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑運(yùn)出胞外，這樣的熒光信號(hào)可以用于標(biāo)記一些和向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)的亞細(xì)胞器與途徑。 |
2樓2016-11-20 20:37:38
3樓2016-11-20 21:13:44
5樓2016-11-21 17:00:20
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