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[交流]
凍融法回收DNA片段操作步驟
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1. 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于1.5ml離心管中； 2. 加入等體積的Tris-HCl飽和酚（pH 7.6），振蕩混勻； 3. -20℃放置5-10min； 4. 4℃離心10000g×5min，上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中； 5. 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中，振蕩混勻； 6. -20℃，放置5-10min； 7. 4℃離心10000g×5min，合并上清液； 8. 用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次，取上清； 9. 加入1/10體積3M NaAc（pH 5.2）、2.5倍體積預(yù)冷的無水乙醇，混勻； 10. -20℃，靜置30min； 11. 4℃離心13000g×10min，棄上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干； 12. 加適量H2O或TE溶解沉淀。 |
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