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18252710045新蟲 (初入文壇)
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[交流]
菜雞入門~請問熒光定量PCR如何根據(jù)CT值計(jì)算基因表達(dá)量做出圖表~在線等~急 已有4人參與
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小弟剛開始做QRT-PCR的實(shí)驗(yàn)，很多東西不懂，想請教一下大神們。 我現(xiàn)在是在用熒光定量篩選基因，沒有處理組，樣品就是最原始的植物�，F(xiàn)在熒光定量跑完了，要做出圖表來，如何根據(jù)目的基因和內(nèi)參的CT值，計(jì)算目的基因的表達(dá)量呢？我看了很多△△ct的方法，那些似乎都是計(jì)算處理組和對照組之間的相對表達(dá)量，那么我這個沒有處理組，應(yīng)該如何計(jì)算呢？ 不知道我說清楚沒有。舉個例子 目的 22 內(nèi)參 18 △CT=22-18=4 我只有這些，那么接下來怎么分析數(shù)據(jù)做圖表呢？ 因?yàn)槲矣袔资畟�基因，就是比較幾十個基因的表達(dá)量，看哪個高哪個低，樣品是單一的。 在線等~急求指教  |
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相對定量不同基因不能比較吧。引物設(shè)計(jì)好壞都會影響擴(kuò)增結(jié)果，就是你同樣一個基因序列，設(shè)計(jì)出多個引物去做qpcr的結(jié)果都會不一樣。�；蛘吣闳プ鼋^對定量看看，利用標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該就可以了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-12-05 13:36:46
月夜鳴鳴
銅蟲 (初入文壇)
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將其中一個基因的表達(dá)量作為參照就可以了，最好是同一批做下來，分批做也可以，但每次都要把該基因作為參照，而且每次該基因的ct值不能有太大出入，這樣就可以比較不同基因表達(dá)量了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-12-05 13:48:11
18252710045
新蟲 (初入文壇)
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4樓2016-12-05 15:53:52
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我覺得是不能比的，你根本不能說明某個基因的Ct值很大是實(shí)際上這個基因的表達(dá)量本來就很少，還是因?yàn)橛捎谀銓@個基因的引物設(shè)計(jì)不好，或者沒有選擇該基因的最優(yōu)溫度來做，又或者是這一次儀器對熒光信號的吸收程度不一樣導(dǎo)致的。等等。。然后如果做絕對定量的話，估計(jì)你就得重新去做了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-12-05 18:24:53
6樓2016-12-08 19:50:30
硫酸童
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7樓2016-12-08 23:17:03
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