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蛋白質(zhì)鹽析分離法 已有2人參與
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一、蛋白質(zhì) 鹽析分離的原理： 蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中溶解度會(huì)隨著鹽濃度的增大而上升(鹽溶)，當(dāng)鹽濃度增大到一定數(shù)值時(shí)，其溶解度又逐漸下降直至蛋白質(zhì)析出。鹽析的發(fā)生是由于鹽濃度增大到一定數(shù)值時(shí)使水活性降低，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子 表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，引起蛋白質(zhì)分子之間相互聚集并從溶液中析出，最后經(jīng)離心機(jī) 分離后獲得沉淀物和上清液。 二、影響蛋白 質(zhì)鹽析分離的因素： 1、蛋白質(zhì)濃度 ： 蛋白質(zhì)濃度過(guò)大，鹽析時(shí)發(fā)生共沉現(xiàn)象，分離效果不好。蛋白質(zhì)濃度太稀，耗鹽量過(guò)大，蛋白質(zhì)回收率低。一般蛋白質(zhì)濃度在2.5%～3.0%較適中。 2、離子強(qiáng)度： 離子強(qiáng)度越大，蛋白質(zhì)的溶解度越低，越容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象。 3、離子類(lèi)型： 離子半徑小而價(jià)數(shù)高的離子，對(duì)鹽析影響較強(qiáng)。離子半徑大而價(jià)數(shù)低的離子，對(duì)鹽析影響較弱。 4、PH值： 蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多，溶解度越大。凈電荷為零時(shí)，溶解度最低。一般將PH值調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近，這樣有利于鹽析。 5、溫度： 低離子強(qiáng)度或水中，在一定范圍內(nèi)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大。高鹽溶液中，蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高有時(shí)反而下降。一般情況下在0～4℃操作。 |
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