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su2008su11木蟲 (正式寫手)
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[求助]
自殺質(zhì)粒連接不上，是連接酶的問題嗎？ 已有1人參與
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剛接觸基因敲除，用的是pEX18Tc自殺質(zhì)粒。已構(gòu)建完成帶有上下同源臂、中間插入卡娜抗性基因的片段�，F(xiàn)在想把該片段和自殺質(zhì)粒連接到一起。將二者使用相同的酶切后，用“天根”的T4 DNA連接酶(RT406)。轉(zhuǎn)化到DH5a的感受態(tài)細(xì)胞中，在含有卡娜和四環(huán)素的雙抗板上篩選，結(jié)果就是看不到菌落。 查閱文獻，看到基本都是使用寶生物TAKARA家的T4連接酶。想請教一下，這種情況，是我使用的連接酶造成的嗎？ |
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kiki1991
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2樓2017-02-22 19:33:16
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