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xmczhby新蟲 (小有名氣)
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DNA純化實(shí)驗(yàn)
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DNA純化可以：（1）獲得高純度的DNA；（2）濃縮DNA；（3）用于測(cè)序、遺傳信息分析等分子生物學(xué)應(yīng)用。 PCR清潔試劑盒純化法 實(shí)驗(yàn)方法原理 硅膠膜可在高鹽條件下結(jié)合DNA，又可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物、單核苷酸、酶、礦物油、鹽離子等雜質(zhì)因?yàn)闆]有與DNA相似的特性，所以被分離開來。 實(shí)驗(yàn)材料 PCR產(chǎn)物 試劑、試劑盒 PCR清潔試劑盒 儀器、耗材 96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V型底板 實(shí)驗(yàn)步驟 一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性 1. 說明書，耗材：96孔DNA制備板，96孔1.6 ml深孔板，96孔V型底板。 2. Buffer PCR-A：DNA結(jié)合溶液。室溫密閉貯存。若出現(xiàn)沉淀，應(yīng)于65°C溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。 3. Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，根據(jù)瓶上指定的體積加入乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存�？捎�100%乙醇或95%無水乙醇。 4. Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5。室溫密閉貯存。 二、操作步驟 用戶可以選擇負(fù)壓法或離心法。 A. 負(fù)壓法 1A. 正確連接負(fù)壓裝置，將96孔DNA制備板置于負(fù)壓裝置上；在PCR、酶切、酶標(biāo)或測(cè)序反應(yīng)液中，加3個(gè)體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混合均勻后轉(zhuǎn)移到96孔DNA制備板中，開啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸掉板中溶液。 2A. 加0.3 ml Buffer W2，吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。 * 確認(rèn)在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。 3A. 保持負(fù)壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。 4A. 導(dǎo)流管朝下將96孔DNA制備板于長(zhǎng)纖維性紙巾上用力拍擊6次。 5A. 將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min�！�3 000×g離心5 min洗脫DNA。 B. 離心法 1B. 在PCR、酶切、酶標(biāo)或測(cè)序反應(yīng)液中，加3個(gè)體積的Buffer PCR-A（若Buffer PCR-A不足100 μl，加至100 μl）；混勻后，轉(zhuǎn)移到96孔DNA制備板中，將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中，1 000×g離心1 min，棄濾液。 2B. 在96孔DNA制備板中，加0.3 ml Buffer W2，1 000×g離心1 min，棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。 * 確認(rèn)在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇。 3B. 將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，≥3 000×g離心10 min。 4B. 將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中，在膜正中央加25-30 μl水或Eluent，室溫靜置1 min�！�3 000×g離心5 min洗脫DNA。 注意事項(xiàng) 1. 將洗脫液或水加熱至65°C，有利于提高洗脫效率。 2. DNA分子呈酸性，建議在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脫液中保存。 |
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