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jinnini125木蟲 (小有名氣)
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[求助]
克隆啟動(dòng)子的方法
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目前只拿到了三個(gè)基因的開放閱讀框，沒有全長(zhǎng)，如何拿到基因的啟動(dòng)子？基因組步移？TRIL PCR？誰具體操作過？指點(diǎn)一二，謝謝。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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先買個(gè)基因組試劑盒，用來提取細(xì)胞的基因組DNA，然后在PUBMED上設(shè)計(jì)該基因的啟動(dòng)子去，一般為轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游2000，下游1000個(gè)bp，設(shè)計(jì)一對(duì)引物合成，用基因組DNA擴(kuò)增啟動(dòng)子區(qū)就好了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-12-17 11:00:30
jinnini125
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提取植物細(xì)胞DNA，然后設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增就好了？關(guān)鍵是我的作物沒有任何參考序列，沒有基因組沒有轉(zhuǎn)錄組。如何設(shè)計(jì)引物？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2016-12-17 11:05:40
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那買genome walking的試劑盒就好，TAKARA就有的，按照試劑盒操作，主要是設(shè)計(jì)三條高退火溫度的特異引物與試劑盒里的四條低退火溫度非特異引物進(jìn)行熱不對(duì)稱PCR 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-12-17 11:15:35
jinnini125
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5樓2016-12-17 11:18:00
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6樓2016-12-17 11:41:29
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7樓2016-12-17 11:44:00
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在用試劑盒之前，需要對(duì)自己的序列和模板進(jìn)行驗(yàn)證？先用cDNA序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物來擴(kuò)基因組DNA，測(cè)序驗(yàn)證？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
8樓2016-12-28 19:55:47
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