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上官abc金蟲 (正式寫手)
王下七武海
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[交流]
重組蛋白掛不上柱子，能否通過改變誘導(dǎo)條件來改變其折疊情況?
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我的重組蛋白鎳柱純化掛不上柱子，應(yīng)該是hiS標(biāo)簽被包埋了，然后我就把重組蛋白用含8M尿素的溶解液將蛋白質(zhì)重新溶解，上柱子純化，這次在高濃度咪唑出出現(xiàn)了目的蛋白。這樣的得到的目的蛋白算是包涵體還是正常蛋白呢？畢竟我看到有人說尿素溶解會(huì)使蛋白質(zhì)變性。 另外，能不能通過改變誘導(dǎo)條件來改變表達(dá)蛋白的折疊情況來使HiS標(biāo)簽外露呢？一般都選擇哪些條件來改變？謝謝了！ |
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低溫低誘導(dǎo)劑一般轉(zhuǎn)速 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-12-17 23:12:33
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我用16度0.6mM iptg 200rpm搖。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-12-17 23:13:41
Bioexperixgs
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收集蛋白濾液檢測一下看看有沒有掛住，如果這一步掛上去了，那就是洗的時(shí)候洗掉了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-12-17 23:15:09
閑來小譯
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5樓2016-12-18 04:04:40
wlt728
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6樓2016-12-18 09:54:13
mataomatao
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7樓2016-12-18 09:54:56
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首先考慮換tag，最終換boundary，和折疊有關(guān)，和誘導(dǎo)沒太大毛關(guān)系。gst，gb1，trx，mbp上啊 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
8樓2016-12-18 10:26:43
上官abc
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9樓2016-12-20 14:16:47
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10樓2016-12-20 14:17:08
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