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michael9911新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助 ORF質(zhì)粒擴(kuò)增雙酶切后 DNA跑膠條帶略大于目的條帶大小
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各位大俠，origene購(gòu)買的wee1 ORFclone 質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化DH5后，QIAprep mini kit 提質(zhì)粒，濃度在200ng/ul，A280/260 1.90， A260/230 2.26， Mlu1和Sgf1雙酶切后產(chǎn)物跑膠（1% Agrose），目的ORF 1942bp，整個(gè)質(zhì)粒8.6Kb，跑膠電壓120V， SYBR-Safe染色，跑完膠，切出來的條帶在2Kb-2.5Kb之間，比理論的要大一些。 各位大俠問題：1、為什么目的條帶都略大于理論大��？2、為什么條帶濃度比較淺酶切效果不好么？3為什么沒有空載體部分的條帶？膠孔好像顯影很明顯，有壇子里高手說是因?yàn)橛胢ini kit提后蛋白污染了，而且蛋白污染會(huì)讓目的片段遷移減慢，不過以前沒有出現(xiàn)過這種情況啊。多謝各位高手幫忙！ 說明Lane1、6為marker DNAladder 第一個(gè)亮條帶是3Kb，下面依次是2.5Kb，2Kb，1.5Kb，Lane2、3、4、5是不同的單克隆擴(kuò)增產(chǎn)物，應(yīng)該都是一樣的。 39459090507005920.jpg wxid_befss7hmn9hi21_1482074708598_5.png wxid_befss7hmn9hi21_1482075552639_88.png |
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