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幾種基本蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法之比較
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1. 蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法的基本原理 （1） 紫外分光光度法 蛋白質(zhì)分子終中所含的酪氨酸、色氨酸以及苯丙氨酸殘疾的芳香族結(jié)構(gòu)對(duì)紫外光有吸收作用。其最大吸收峰在280nm 附近。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的質(zhì)量濃度在0.1~1.0g/L之間時(shí)，其紫外吸收值與濃度成正比，可用作蛋白質(zhì)定量測(cè)定。 （2） 雙縮脲法 蛋白質(zhì)含有多個(gè)肽鍵，可發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中，蛋白質(zhì)與銅離子形成紫紅色絡(luò)合物，可在540nm比色測(cè)定。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的質(zhì)量濃度在1.0~10.0g/L之間時(shí)，其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量及氨基酸組成無關(guān)。 （3） Folin-酚試劑法 這種方法是對(duì)雙縮脲法的發(fā)展。蛋白質(zhì)與堿性銅溶液中的二價(jià)銅離子絡(luò)合使得肽鍵伸展，從而使暴露出的酪氨酸和色氨酸殘基在堿性銅條件下還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑（ Folin試劑）產(chǎn)生深藍(lán)色，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的質(zhì)量濃度在0.02~0.5g/L之間時(shí)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸的含量成正比。 （4） 考馬斯亮藍(lán)法 考馬斯亮藍(lán)G-250具有紅色和青色兩種色調(diào)，在酸性溶液中游離狀態(tài)下為棕紅色。當(dāng)它通過疏水作用與蛋白質(zhì)結(jié)合后變成藍(lán)色，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸的殘基相結(jié)合。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的質(zhì)量濃度在0.05~0.5g/L之間時(shí)，在595nm下測(cè)定的吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比。 |
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