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Jasur.A新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
【哪位高手】跪求細(xì)菌 菌落Pcr 的快速、可靠的方法
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跪求細(xì)菌 菌落Pcr 的、快速可靠的方法，求詳細(xì)的步驟。 細(xì)節(jié)（基本方法？、細(xì)菌細(xì)胞壁的破碎？（用什么、濃度多少？用什么稀釋?zhuān)浚�、PCR體系成分？、核酸燃料濃度多少？，用什么稀釋?zhuān)�、膠里加多少？、 通用引物濃度是多少？ 用什么稀釋?zhuān)俊?PCR 程序怎么設(shè)置？ 、求大神幫忙！！ 謝謝！ |
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wentan0504
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以前做過(guò)……用小槍頭挑一些放到體系中去，pcr體系和之前擴(kuò)增目的片段時(shí)完全一致，只是把模板變成菌液，不用破壁（大腸桿菌） 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2017-01-01 01:49:06
xtcao668
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3樓2017-01-01 09:52:55
Jasur.A
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4樓2017-01-01 16:34:32
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5樓2017-01-01 16:36:19
jianglin0116
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細(xì)菌涂板，長(zhǎng)成單菌落之后，用滅菌的小槍頭挑取單菌落，蘸在液體培養(yǎng)基里面吸打混勻，37℃，270r培養(yǎng)3小時(shí)，然后吸取一微升作為模板，pcr體系可以25微升，也可以50微升，體系里包括模板，引物，dntp，mg離子，k離子，酶，buffer等，看你是用單酶還是用MIX，如果用MIX的話很方便，推薦擎科生物公司的低鹽金牌，菌p很給力，體系構(gòu)成是，模板一微升，上下游引物各一微升，剩余用金牌MIX補(bǔ)齊就可以了，程序要看你引物的Tm值確定退火溫度，延伸時(shí)間要看你片段大小，擎科的金牌mix延伸速度很快，5-10s/kb，短片段半個(gè)多小時(shí)就可以擴(kuò)出來(lái) 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
6樓2017-01-13 10:57:59
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