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[交流]
詢問有關引物設計方面的問題
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問有關引物設計方面的問題？ （1）請問引物的Tm值及GC含量的計算是用已經加了酶切位點及保護堿基的引物來計算嗎？ （2）所說的引物長度也包含了酶切位點及保護堿基嗎？ （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列嗎？ （4）酶切位點的保護堿基是要在酶切位點兩端都要加嗎？ 請大家?guī)兔獯鹨幌�，謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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8樓2017-01-01 22:18:41
9樓2017-01-01 22:22:46
10樓2017-01-01 22:22:56
11樓2017-01-01 22:25:32
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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Tm值和GC含量，我一般加酶切位點和不加酶切位點都看，只要Tm值一度以內就可以。保護堿基根據(jù)實際情況吧，可以加也可以不加吧。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
12樓2017-01-01 22:29:01
13樓2017-01-01 22:35:23
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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你的第四個問題，有歧義，如果加的話，就要加在酶切位點的外側，靠近原序列那測不能加。因為有的酶需保護堿基提供位置支撐點，所以最好加上。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
14樓2017-01-02 09:11:15
15樓2017-01-02 15:15:13
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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（1）請問引物的Tm值及GC含量的計算是用已經加了酶切位點及保護堿基的引物來計算嗎？ 一般是加酶切位點及保護性堿基前的Tm值和GC含量。 （2）所說的引物長度也包含了酶切位點及保護堿基嗎？ 不知道你指的是什么時候的引物長度，如果試驗對設計引物長度有要求，應該就不包括酶切位點及保護性堿基。 （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列嗎？ kozak序列應該是只需加在上游引物的5'端就行。 （4）酶切位點的保護堿基是要在酶切位點兩端都要加嗎？ 應該是看情況吧，我覺得如果是連加兩個或以上酶切位點最好兩端都加上吧，畢竟兩個酶切位點離得太近對雙酶切有一定影響，如 果只加一個酶切位點，我覺得就在一端加就行了，應該是加在5'端。 以上個人經驗及理解，僅供參考！  |
16樓2017-01-03 11:39:56
17樓2017-01-03 21:03:32
簡單回復
tan9142樓
2017-01-01 19:05
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賀夏(金幣+1): 謝謝參與
dsctg3樓
2017-01-01 19:20
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賀夏(金幣+1): 謝謝參與
playman4樓
2017-01-01 20:11
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1
青云丹鶴5樓
2017-01-01 20:22
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祝福
tzynew6樓
2017-01-01 22:01
回復
賀夏(金幣+1): 謝謝參與
2017-01-01 22:11
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