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hnnydx木蟲 (著名寫手)
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[交流]
如何保證提取質(zhì)粒DNA的完整性 已有2人參與
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| 如何保證提取質(zhì)粒DNA的完整性，需要注意什么？ |
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2樓2017-01-10 16:33:46
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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額，我做實(shí)驗(yàn)一般都是用提質(zhì)粒的試劑盒的，但是這里可以回答下怎么驗(yàn)證提取出來的質(zhì)粒是否完整 驗(yàn)證方法： 瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定質(zhì)粒DNA時(shí)，多數(shù)情況是三條帶，堿法抽提得到質(zhì)粒樣品中不含線性 DNA，線性質(zhì)粒DNA的位置與這三條帶的位置不一樣�？斓铰判颍撼菪㈤_環(huán)和復(fù)制中間體（即沒有復(fù)制完全的兩個(gè)質(zhì)粒連在了一起）。如果在溶液II加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動(dòng)得較慢，遠(yuǎn)離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。非常偶然的是，有時(shí)候抽提到的質(zhì)粒會有7－10條帶，這是由于特殊的DNA序列導(dǎo)致了不同程度的超螺旋（超螺旋的圈數(shù)不同）所致。 臨床多重耐藥菌株的質(zhì)粒，采用的是也是堿裂解法，電泳結(jié)果是有很多條帶的。臨床菌株有大小不同質(zhì)粒，有的多達(dá)10多條，像marker一樣。也有的臨床菌株只有1條帶。 |
3樓2017-01-11 10:43:25
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