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HPV病毒DNA提取流程 已有1人參與
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異丙醇 1. DNA不溶于異丙醇，加入異丙醇減少DNA溶解度，使得DNA析出。使得dna 和少量蛋白質(zhì)析出產(chǎn)生白色絮狀沉淀。降低分子運(yùn)動，易于形成沉淀。靜置時間越長DNA得率越高。溶液一成分：SNETSDS十二烷基磺酸鈉：可破壞細(xì)胞膜、核膜，并使組織蛋白與DNA分離 NACL 調(diào)節(jié)鹽離子濃度 EDTA 螯合金屬離子，抑制DNA酶 Tris鹽酸 酸堿平衡 溶液二：異丙醇溶液三：滅菌注射用水。（為什么在整個DNA提取過程中沉淀DNA需要冰冷的異丙醇或者乙醇？常溫的有什么樣的影響？因?yàn)榈蜏乜梢源龠M(jìn)DNA的沉淀，在DNA量很少的情況（比如你的實(shí)驗(yàn)）可以提高抽提效率。不過如果DNA量較多時，常溫也沒問題） 注意事項(xiàng)： 1，樣本離心后粘液，雜質(zhì)多，用槍吸出部分溶液，盡量上清去干凈。 2， 樣本中血液，雜質(zhì)較多時用細(xì)胞保存液，PBS，滅菌注射用水蒸餾水，清洗一遍。 3， 煮沸時切勿讓管蓋爆開，加熱裂解的時間可適當(dāng)延長到20分鐘。 4， 加熱后，樣本離心10分鐘為佳。 5， 加模板時，盡量將槍頭保持在液面靠上的位置。 6， 血液，雜質(zhì)較多樣本加樣前可按5-10倍比例稀釋模板，在進(jìn)行擴(kuò)增。 一步法提取DNA: 特殊樣本用細(xì)胞保存液清洗一遍 1,提取500UL樣本 （可適量減少） 2. 14000RPM 離心7分鐘，去上清 3.加入50UL 裂解液 震蕩混勻 4.加熱17分鐘 5.14000RPM離心7分鐘 6.特殊樣本，模板稀釋5-10倍，再加樣 擴(kuò)增試劑 1， 建議按人份混合酶和MIX混合液，剩余分開保存。如混合好的試劑勿反復(fù)凍融，防止酶失活。 2， pcr管有無問題，保存適當(dāng) 3， 擴(kuò)增儀升降溫有無問題，各孔間溫差，擴(kuò)增程序。 雜交 1， 變性時間，冰水溫度，PCR管內(nèi)產(chǎn)物有無揮發(fā)，管底產(chǎn)物要浸入冰水至少2分鐘。 2， 雜交時間適當(dāng)延長到15min 3， 加樣用槍吹打幾次，使模板與雜交液混勻。 |
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2樓2017-01-18 10:46:46
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