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[交流]
菌液pcr
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現(xiàn)在挑取單菌落，20ul體系，出現(xiàn)模糊的條帶，引物二聚體很嚴(yán)重，請(qǐng)問(wèn)大家怎么能p出條帶，避免引物二聚體的出現(xiàn)？引物啊現(xiàn)在已經(jīng)是0.5ul了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-31 21:35:55
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引物濃度多大的，是10uM的嗎，該不會(huì)是100uM的吧？標(biāo)準(zhǔn)的使用應(yīng)該是50ul體系用1ul，我們用菌液pcr只使用體系10ul，不知道你用的什么酶，taq還是pfu或者primerstar酶？是什么模板啊，待驗(yàn)證質(zhì)粒的還是已驗(yàn)證的用來(lái)p片段做克隆的啊，你不說(shuō)清楚怎么給你解決？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-01-31 20:09:37
賈子陽(yáng)009
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2樓2017-01-31 11:13:00
褲頭村的稻米
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-01-31 21:36:13
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菌沾一下下就行，我做的是青枯，在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)出來(lái)的單菌落條帶不是很亮，純培養(yǎng)以后條帶很亮，二聚體很少。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2017-01-31 20:43:05
痞子無(wú)敵
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5樓2017-02-01 08:42:34
strmond
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第一，很可能是假陽(yáng)性克隆；第二，調(diào)一下退火溫度。第三，目的條帶多大，是用何種酶PCR 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2017-02-01 09:14:48
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8樓2017-02-01 11:50:25
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我的引物濃度10um，用的green. mix酶，做宏基因組文庫(kù)的篩選，用于p ks片段，最后測(cè)序用。但是之前菌夜pcr還是很好的，現(xiàn)在做菌落pcr為什么引物二聚體這么多么？今天老師說(shuō)菌的數(shù)量有些多，是不是這么個(gè)道理，還說(shuō)泡膠時(shí)間要長(zhǎng)一些？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2017-02-01 11:55:30
strmond
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