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紀孟君新蟲 (初入文壇)
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新手求助克隆 已有4人參與
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各位大神，我的目的基因是2000左右，我連T載體做轉(zhuǎn)化，菌長得也挺好，可是菌液PCR啥都沒有，這是沒連上嗎？？求大神指點 還想求助下大神們平時用的克隆載體有哪些 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2017-02-25 09:18:44
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對照要好，ta克隆確實不好做，我想應(yīng)該和自身片段的加a效率也有關(guān)系，這個可能和用的擴增酶有關(guān)，我之前做的陽性對照百分百連上，但是目的片段就是連不上或者連接效率低 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-02-25 15:42:23
紀孟君
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7樓2017-02-25 16:55:29
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3樓2017-02-25 10:27:28
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5樓2017-02-25 15:43:45
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6樓2017-02-25 16:53:35
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菌長得很好，但是沒有P出來，如果PCR條件一切正確，那就說明是假陽性，這種情況，很大程度上是酶切沒有切好，頭沒有切開，連接不上，或者極少部分連接，導致假陽性太多！好好切吧，加大酶切濃度，延長酶切時間。祝你好運 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2017-02-26 07:43:23
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10樓2017-02-26 09:54:34
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