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MMMathilda新蟲 (初入文壇)
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[求助]
MES在此方法中的作用，是否可以用其他緩沖液代替？
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測酵母胞內(nèi)pH: 用50mM的MES緩沖液清洗2次,每次5mL。(MES緩沖液,含有110mM NaCl,5mM KCl,1mM MgCl2,pH6.20,1℃。)離心得到的酵母泥用上述1℃的3mLMES懸浮。0.03mL,10mM的乙�；�5(6)-羧基熒光素溶液(用DMSO配制)加入到上述酵母上清液中,劇烈震蕩1min,使混合均勻,并把它保持在冰浴中15min。再混勻,再保持15min,然后用1℃的MES清洗3次有5(6)-羧基熒光素的酵母泥,每次用5mLMES。上述離心后的酵母泥中加入7mL,50mM的檸檬酸鹽-磷酸氫二鈉緩沖液(1℃ ,pH3.0,含有110 mM NaCl,5 mM KCl,1mMMgCl2)。離心后,再用上述緩沖液清洗2次,每次用5mL。離心得到的酵母泥再加入上述緩沖液7mL。把它保持 在冰浴中90min(每隔30min搖晃一次,以免沉淀)。離心后,酵母泥在室溫條件下,重新用上述緩沖液3.0mL懸浮。將上述懸浮液立即在激發(fā)波長為Ex=488nm,發(fā)射波長為Em=518nm下測定熒光值,再在激發(fā)波長為Ex=441nm,發(fā)射波長為Em=518nm下測定熒光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以得到響應(yīng)的胞內(nèi)pH值。 看到國外用流式細(xì)胞儀的方法里面都沒有用MES，這篇是用熒光酶標(biāo)儀，不知為何這里要有MES。請問這里的MES是否有特殊作用？能否用其他緩沖液代替？請教了  |
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