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piggyflym金蟲 (正式寫手)
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[求助]
急求助，融合PCR融合不出的問題 已有1人參與
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同源敲除，左臂1000bp左右，右臂850bp，抗性片段2100bp。左臂的下游引物與抗性片段上游引物；右臂的上游引物與抗性片段的下游引物有互補(bǔ)部分。 用的Es Taq酶，摩爾比 左臂：抗性片段：右臂=1：3：1，20μl體系 94℃ 5min 94℃ 30s 58℃ 30s 72℃ 2min10s 30cycle 第一次碰上融合不上的情況，求大神  |
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piggyflym
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3樓2017-03-09 15:32:16
badronger
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★ ★
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2017-03-10 07:40:56
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2017-03-10 07:40:56
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三個(gè)片段的添加比例是根據(jù)摩爾濃度來的，不知道你是怎么確定的，然后融合是需要兩步pcr的，第一步不添加引物，循環(huán)十幾次，第二次pcr 只添加引物，再循環(huán)30左右，而且50微升體系會不會好一點(diǎn)，我是一直用50的，是為了膠回收濃度大一點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2017-03-09 09:19:57
piggyflym
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5樓2017-03-11 03:10:03
萌萌笑笑
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6樓2017-03-25 16:28:13
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