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risic新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助PCR以前能出條帶現(xiàn)在卻沒有了 已有1人參與
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大四作為畢設(shè)，時間沒多少了，pcr又出問題，求各位大神幫忙了！ 1.一開始是用老師提的基因組為模板，做了很多次都有條帶； 2.后來老師提的基因組快用完了，我就自己提了基因組（模板濃度稀釋到和之前一樣），做50ul*5的大體系，大孔全部上樣，條帶很淺，曝光才能看到 3.為了優(yōu)化，我又做了25ul的小體系，模板濃度加倍、減半，又設(shè)置了4個梯度退火溫度，一共六管樣品，10ul上樣全無條帶！只有很亮的引物二聚體。 4.今天又試了一次，把之前老師提的基因組剩下的一點點拿來做陽性對照，結(jié)果也沒有條帶 自己想法： 1.所以反應(yīng)體系和反應(yīng)溫度都沒有改變，唯一記得有不同的是3和4用的taq酶是沒有加甘油的，我有查到甘油會影響特異性，不過現(xiàn)在不是雜帶的問題而是不出條帶的問題。 2.如果說是操作中的偶然失誤的話，我不至于做了那么多管一管都沒出條帶吧 3.還有大體系有條帶怎么小體系就沒有了？ |
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lusandanooo
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