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upwardkl新蟲 (初入文壇)
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[求助]
誘導表達的蛋白主要在包涵體中，已帶有GST標簽，求助分離純化的操作方法？ 已有1人參與
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求助: 誘導原核表達，進行SDS-PAGE檢測，主要以包涵體的形式出現(xiàn)，查詢得知有超濾、透析等方法，但不知道具體該如何操作？  購買了一個GST分離純化的試劑盒，，，但說明書為英文版，，看得似懂非懂，，，不知如何下手？  望高手指點，謝謝你們！  |
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藍藍0921
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2樓2017-04-18 21:47:06
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3樓2017-04-18 21:48:58
Hjqilu
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4樓2017-04-19 00:16:24
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5樓2017-04-19 19:50:08
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6樓2017-04-19 19:50:56
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超濾和透析都是后續(xù)工作，你首要任務讓蛋白可溶，GST本來是為了讓蛋白可溶的，要是加了GST還是包涵體，可以考慮更換培養(yǎng)基，用TB培養(yǎng)基可以提高可溶性，降低誘導劑濃度和誘導溫度，可以拿到可溶的蛋白，不推薦進行包涵體復性，GST融合蛋白蛋白復性不成功不會掛柱，后續(xù)純化仍然很麻煩 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-04-19 22:38:52
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8樓2017-04-20 20:26:09
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