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熒光定量PCR做反應(yīng)效率問題，質(zhì)粒做模板
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求助！ 投稿了SCI，編輯說熒光定量要做目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率。 老師說模板要稀釋10倍，做五個梯度，可是擔(dān)心cDNA的效果不好，讓我做克隆，用質(zhì)粒來做模板， 我用熒光定量的目的基因和內(nèi)參基因的引物做了PCR，切膠回收連接轉(zhuǎn)化到DH5α大腸桿菌中，下一步做菌液提質(zhì)粒。 這個步驟對嗎？ 還有，熒光定量的時候是不是內(nèi)參基因用內(nèi)參基因的質(zhì)粒。目的基因用目的基因的質(zhì)粒。 分別做他們的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求目的和內(nèi)參的擴(kuò)增效率。可是擴(kuò)增效率怎么算呀？ |
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2017-04-20 07:42:33
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其實用cDNA完全可以的，還不用擔(dān)心你最后提到的那個模板問題，如果效果會不好說明你的引物就是不行。步驟：反轉(zhuǎn)錄好cDNA后，稀釋10倍，100倍，1000倍等等，就可以畫標(biāo)準(zhǔn)曲線了，擴(kuò)增效率通過斜率算，具體的忘了。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2017-04-20 00:52:45
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