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出芽酵母君新蟲 (初入文壇)
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[求助]
半乳糖誘導(dǎo)高表達(dá)一個(gè)基因，目的菌株在平板上沒有表型 已有2人參與
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設(shè)計(jì)了一個(gè)半乳糖誘導(dǎo)一個(gè)基因高表達(dá)的載體，整合到了釀酒酵母的基因組里。然后將目的菌株梯度稀釋后點(diǎn)在加有半乳糖的YP平板上。其他的課題組做出的表型很明顯，在加有半乳糖的YP平板上目的菌株應(yīng)該一點(diǎn)都不生長(zhǎng)，野生型生長(zhǎng)的很好。我的工作應(yīng)該是重復(fù)出這個(gè)結(jié)果，但是不知道哪里有問題，目的菌株和野生型在加有半乳糖的YP平板上生長(zhǎng)的一樣好。我嘗試過把酵母浸粉和蛋白胨替換成酵母氮源的培養(yǎng)基，完全剔除了葡萄糖的影響，但是表型還是一樣的。求助大神，救我于水火。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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順便加一句，正在嘗試不同品牌的半乳糖，現(xiàn)在使用的是Amresco的半乳糖，還有一個(gè)國(guó)產(chǎn)的不知道什么牌子的半乳糖，都不好用。正在訂sigma的半乳糖，還沒有到。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-04-19 17:26:28
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有可能蛋白未表達(dá)，或表達(dá)的非目的蛋白。檢查一下表達(dá)載體序列是否錯(cuò)誤，還可以WB分析一下 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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出芽酵母君
3樓2017-04-20 00:30:26
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4樓2017-04-25 07:18:10
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5樓2017-04-26 10:55:22
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6樓2017-04-27 15:41:09
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嗯嗯，謝謝大家的關(guān)注。問題已經(jīng)解決了，是試劑的問題。國(guó)產(chǎn)的試劑質(zhì)量沒有保障，換成了國(guó)外的全套培養(yǎng)基試劑后問題就解決了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-07-28 08:15:22
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