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Catherine92金蟲 (小有名氣)
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[交流]
你一定要知道的 Western Blot 實(shí)驗(yàn)的四大經(jīng)驗(yàn)！
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Western Blot 中文名稱“蛋白免疫印跡反應(yīng)”，是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。 此項(xiàng)技術(shù)向來是會(huì)的人做著有趣，沒掌握訣竅的人做起來藍(lán)瘦，香菇。 這就帶你提煉一下實(shí)驗(yàn)技巧。 工欲善其事，必先利其器。 Western Blot實(shí)驗(yàn)設(shè)備，若是剛剛開始搭建該平臺(tái)，有條件的可以找專業(yè)的公司直接為你搭配，省心省力。也可以自行選擇，需要自己多花時(shí)間和精力搜集資料，總結(jié)來說，根據(jù)操作步驟來準(zhǔn)備主要如下： 一：電泳 電泳儀 、制膠板、 電泳槽�？梢赃x擇國(guó)外的，但是價(jià)格肯定是不便宜的。而且據(jù)小編所知的國(guó)外某品牌的電泳槽是用綠色塑料夾住玻璃板來組成內(nèi)槽，容易漏液，塑料夾應(yīng)該是有疲勞壽命的，估計(jì)日子一長(zhǎng)，彈性就會(huì)改變，所以聰明的實(shí)驗(yàn)室會(huì)在用很久之后，定期更換電泳儀系統(tǒng)。我大中華的制造力也是不容小覷的，國(guó)內(nèi)有一款電泳儀的垂直槽跟轉(zhuǎn)移槽很好用，型號(hào)是DYY-11型電腦三恒多用電泳儀。 二：轉(zhuǎn)膜 如果是使用濕轉(zhuǎn)的話，只要在有電泳儀的基礎(chǔ)上再買一套濕轉(zhuǎn)的槽，就ok了。如果想使用干轉(zhuǎn)的話，還需要另外購(gòu)買半干轉(zhuǎn)儀，有的實(shí)驗(yàn)室用半干轉(zhuǎn)，價(jià)錢大概是免稅15000元左右。 三：漂洗 只需要購(gòu)買一個(gè)脫色搖床就ok。用到搖床，一般是兩種，一個(gè)左右rolling的那種，一個(gè)是圓周運(yùn)動(dòng)的那種，都需要。 四：顯影 如果使用傳統(tǒng)的X光片，需要準(zhǔn)備一個(gè)暗室，還有就是買個(gè)紅外燈就可以了。如果要用直接掃描顯影的話，需要購(gòu)買一臺(tái)成像系統(tǒng)，不是凝膠成像，是針對(duì)膜上蛋白的成像系統(tǒng)，有的實(shí)驗(yàn)室用的是odyssey近紅外雙色掃描系統(tǒng)，免稅價(jià)格大概為56000美金，也有國(guó)產(chǎn)類似的產(chǎn)品，價(jià)格會(huì)稍微便宜些。 五：凝膠圖像分析 發(fā)光液選擇也很重要，市場(chǎng)上發(fā)光液種類很多，根據(jù)多年實(shí)驗(yàn)了解美國(guó)advansta和密理博的發(fā)光液效果不錯(cuò)。 將膠片進(jìn)行掃描或拍照，用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的分子量和凈光密度值，比如VILBER的凝膠成像、多色熒光及活體成像系統(tǒng)。 |
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