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w2016yw新蟲 (小有名氣)
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[求助]
issr pcr
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pcr新手,做大豆胞囊線蟲issr體系優(yōu)化,但是不懂的太多不知道從哪開始切入,用參考文獻(xiàn)里的體系和PCR程序都沒有條帶感覺文獻(xiàn)和概念都要背過了還是不懂,可能是幾乎沒有基礎(chǔ)的原因吧,所以不太理解的了,求指點啊啊啊 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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先做了ITS測序,問題不大,然后用文獻(xiàn)里的體系和程序做issr,引物是老師給的,暫時沒有出條帶還在找原因。體系:無菌水18.5,buffer2.5,dNTPs2,鎂離子0.5,引物0.2,DNA模板1,Taq酶0.3,一共25微升。程序:94度5分鐘;94度30s,48度30s,72度2分鐘,循環(huán)35;72度10分鐘 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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因為PCR不能做溫度梯度,所以想從48手動做到58就是麻煩費時。。。文獻(xiàn)里都是35,38循環(huán),所以就試了個35 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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