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林子藥新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
老師，您好，我現(xiàn)在做WB ，需要提取膜蛋白，但是提的膜蛋白濃... 已有1人參與
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老師，您好，我現(xiàn)在做WB ，需要提取膜蛋白，但是提的膜蛋白濃度一直很低，用的是碧云天的膜蛋白抽提試劑盒，操作都是按照說(shuō)明書來(lái)的。唯一不確定就是抽提試劑A 和B的用量，他給的是一個(gè)范圍，2000萬(wàn)到5000萬(wàn)細(xì)胞用1ML A 液（加了Pmsf ），然后幾步離心之后，再加200ulB 液，最后得到膜蛋白。我是用10cm 培養(yǎng)皿養(yǎng)的細(xì)胞，長(zhǎng)到80-90%，每?jī)蓚�(gè)皿的細(xì)胞收集到一起按照上述操作提蛋白。然后每次提的蛋白濃度都特別低，想問(wèn)一下我的濃度低和抽提試劑的用量有沒(méi)有關(guān)系？還有細(xì)胞狀態(tài)不好有影響嗎？有時(shí)候會(huì)有小黑點(diǎn)，求助說(shuō)是支原體污染，有時(shí)候會(huì)有部分死細(xì)胞漂浮。謝謝您 [ Last edited by 林子藥 on 2017-5-8 at 11:32 ]@youlinglyw |
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longqi_2007 
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 52.8
- 紅花: 2
- 帖子: 47
- 在線: 5.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1005412
- 注冊(cè): 2010-04-25
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
2樓2017-05-13 17:02:20
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