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yudaoqian88至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
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[交流]
pGREEN2-0800-LUC載體是否適合農(nóng)桿菌GV3101
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我們將pSOUP輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)入GV3101，長(zhǎng)斑倒是正常的，但無(wú)法在10mg/L正常濃度的四環(huán)素抗性液體培養(yǎng)基中上生長(zhǎng)，不知道是什么原因，一位做過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)的同學(xué)說(shuō)需要共轉(zhuǎn)化。今天仔細(xì)看了文獻(xiàn)，指明可以共轉(zhuǎn)，也可以分兩步轉(zhuǎn)化。但在描述合適的菌株時(shí)未說(shuō)明常用的GV3101能否使用，我們?cè)诓殚單墨I(xiàn)方法時(shí)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)的研究者利用該載體也都是用的GV3101，特來(lái)求助。文獻(xiàn)摘取如下： 文獻(xiàn)信息如下： Plant Molecular Biology42:819–832,2000.©2000KluwerAcademicPublishers.PrintedintheNetherlands.819 pGreen: a versatile and fexible binary Ti vector for Agrobacterium-mediated plant transformation RogerP.Hellens,E.AnneEdwards,NicolaR.Leyland,SamanthaBeanandPhilipM.MullineauxJohnInnesCentre,NorwichResearchPark,Colney,Norwich,NR47UH,UK(authorforcorrespondence;e-mail:hellens@bbsrc.ac.uk;fax:C441603456844)Received8June1999;acceptedinrevisedform30January2000 Keywords: Agrobacterium ,binaryvectors, planttransformation, reportergenes, selectable markergenes, Ti vector 關(guān)于轉(zhuǎn)化部分的描述如下： The pGreen and pSoup plasmids (Figure1) can be used in a mixed electroporation. Inthisinstance, selection for co-transformed Agrobacterium can be achieved using kanamycin-containing medium only, since pGreen can not replicate in Agrobacterium without pSoup being co-resident. Alternatively, electro-competent Agrobacterium containing the pSoup can be generated, by selection for tetracycline resistance, and subsequently re-electroporated with pGreen and selection for kanamycin-resistant colonies: A.tumefaciens strains LBA4404, GV2260, GV3280, AGL-1 and EHA105 and A .rhizogenes strain LBA9402 support pGreen/pSoup replication. |
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lc9031417
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9樓2021-09-15 21:09:56
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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請(qǐng)問(wèn)psoup可以單轉(zhuǎn)大腸桿菌DH5α嗎？轉(zhuǎn)的話tet濃度是多少？ps:我們都是和pgreen共轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌gv3101只加kana抗性，不加tet。希望能幫到你。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2017-07-20 09:09:59
yudaoqian88
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
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3樓2017-07-20 10:43:00
qqhx
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4樓2018-04-23 16:59:31
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