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duowan17金蟲 (正式寫手)
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[求助]
蛋白純化 已有1人參與
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大家好： 有一大腸桿菌重組的蛋白，等電點(diǎn)5.0左右。用陰離子交換（DEAE、QFF）目的蛋白均流穿，PB或Tris緩沖液均如此，嘗試過改變PH值及緩沖液濃度，效果不大，且流穿峰中雜蛋白也比較多。嘗試疏水層析，20%硫酸銨目的蛋白大部分位于上清，30%硫酸銨目的蛋白幾乎全部沉淀，但是沉淀蛋白為不可溶狀態(tài)（緩沖液為PB，用Tris緩沖液溶出蛋白相對(duì)較多一些），在20%硫酸銨條件下，目的蛋白不掛柱，依舊流穿。等電點(diǎn)沉淀（PH5.0），蛋白沉淀后復(fù)溶不可溶。乙醇沉淀-20%乙醇沉淀蛋白復(fù)溶不溶。有沒有經(jīng)驗(yàn)豐富的大神指點(diǎn)迷津，跪謝！ |
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2樓2017-05-31 22:59:48
duowan17
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3樓2017-06-01 13:16:10
liaohongjun
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4樓2017-06-01 15:08:56
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5樓2017-06-01 15:40:10
liaohongjun
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6樓2017-06-02 22:00:03
duowan17
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7樓2017-06-05 15:08:16
walking dead
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【答案】應(yīng)助回帖
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pI5.0，pH7.0，在樣品預(yù)處理(脫鹽等)，柱子充分平衡，上樣量合適(根據(jù)填料吸附量參考)，流速合適。不會(huì)不掛柱的。如果操作沒有問題，結(jié)果不理想。那么既然是重組蛋白，換個(gè)鎳柱親和介質(zhì)試試吧。祝你順利。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2017-06-17 08:53:29
9樓2018-07-14 09:55:02
10樓2018-10-15 00:40:18
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