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Lulu與璐璐新蟲 (正式寫手)
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[求助]
求各位生物專業(yè)類大神解惑�。�！急～～ 已有2人參與
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本人生物類專業(yè)本科一枚，畢業(yè)課題中的內(nèi)容有一點(diǎn)兒疑惑：克隆得到一個基因片段，通過酶切連接的方法與L4440質(zhì)粒構(gòu)成重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，涂板后挑取了單菌落。搖菌培養(yǎng)后，直接以基因片段的引物為引物，以菌液為模版進(jìn)行PCR，擴(kuò)出來的電泳條帶會比直接克隆得到的基因片段條帶大200bP左右嗎？ 這是正常現(xiàn)象嗎？ 為什么會出現(xiàn)這種現(xiàn)象��？ 請各位生物專業(yè)類大神答疑解惑～ 十分感謝�。。� 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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stephen.xie
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2樓2017-06-05 07:56:22
傷何處
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3樓2017-06-05 11:21:25
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4樓2017-06-05 19:39:05
Lulu與璐璐
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5樓2017-06-05 21:33:01
Lulu與璐璐
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6樓2017-06-05 21:33:22
Lulu與璐璐
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送紅花一朵 |
菌液PCR產(chǎn)物電泳條帶顯示比之前克隆出來的目標(biāo)基因條帶 大約大了200左右～ 另外測序結(jié)果顯示是正確的，做菌液PCR的目的是為了驗(yàn)證構(gòu)建重組表達(dá)載體中是否插入了目標(biāo)基因，雖然菌液PCR電泳條帶比目標(biāo)基因條帶長了，但拿去測序結(jié)果完全正確。不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，但我現(xiàn)在面臨畢業(yè)答辯，這一點(diǎn)兒不知道原因，感覺自己面臨評委老師的提問無法解釋～ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2017-06-05 21:40:47
傷何處
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8樓2017-06-05 22:13:18
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2017-06-06 07:47:53
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2017-06-06 07:47:53
| 樓主要看看你做pcr的酶的活性和保真性，活性特別高的酶會p出一些大一點(diǎn)的條帶，但是測序沒什么問題。要不就看跑膠上樣的上樣loading和電泳緩沖液，跑膠中樣品鹽離子濃度低會跑出偏大或者偏小的條帶或者會有雜帶，換個高鹽離子濃度的上樣loading條帶就單一正常了。既然你有引物，可以做個菌落pcr鑒定再挑菌搖菌啊，之后提質(zhì)粒酶切驗(yàn)證，最后酶切電泳圖是最準(zhǔn)的，酶切驗(yàn)證正確的送測序一般就看看有沒有點(diǎn)突變了。你的畢業(yè)答辯要是加上酶切說服力會好一點(diǎn)，菌液PCR條帶大也不是大問題了。 |
9樓2017-06-06 00:16:46
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