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[求助]
細(xì)胞凋亡 試驗(yàn)方法求助 已有2人參與
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各位大神 我做的是植物的花的細(xì)胞凋亡，主要目的是根據(jù)不同時(shí)間段采樣，以測定發(fā)生凋亡的時(shí)期。因?yàn)樗玫臉悠敷w積比較小，而且發(fā)生凋亡的部分是該樣品中很小的一部分，所以，不知道該用哪種方法做細(xì)胞凋亡的測定。個(gè)人覺得用流式細(xì)胞儀等不太現(xiàn)實(shí)，因?yàn)槲业臉悠钒l(fā)生凋亡的部分特別小，而且制成細(xì)胞懸浮液的方法對樣品測定效果應(yīng)該會很不理想。我想問，不制成細(xì)胞懸浮液或者細(xì)胞爬片，以測定細(xì)胞凋亡的方法都有那些？個(gè)人已經(jīng)做了石蠟切片的tunel染色以及免疫組化，不知道還有其他別的方法沒有，，望各位大神不吝賜教！ |
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2樓2017-07-13 14:01:08
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2017-07-13 22:49:30
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2017-07-13 22:49:30
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1、形態(tài)學(xué)檢測法 根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征，使用合適的顯微鏡檢測凋亡細(xì)胞形態(tài)變化。 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡 （1）未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。 （2）染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡 一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。 2、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin-V）法態(tài)學(xué) 磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS 可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中 （圖 3）。Annexin-V 是一種分子量為 35～36 KD 的 Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與 PS 高親和力特異性結(jié)合。將 Annexin-V 進(jìn)行熒光素（FITC、PE）或 biotin 標(biāo)記，以標(biāo)記了的 Annexin-V 作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 還有以下方法： 熒光探針雙標(biāo)記法 DNA ladder 法 Annexin V/PI 雙染色法 TUNEL 法 Caspase-3 活性檢測法 |
3樓2017-07-13 14:26:51
gaojianwen8 
捐助貴賓 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1066.5
- 散金: 361
- 紅花: 2
- 帖子: 174
- 在線: 30.8小時(shí)
- 蟲號: 3182700
- 注冊: 2014-05-05
- 專業(yè): 細(xì)胞周期與調(diào)控
4樓2017-07-13 14:51:10
5樓2017-07-13 20:20:54
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