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小木蟲論壇-學(xué)術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 酶切
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18693104857新蟲 (初入文壇)
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[求助]
酶切 已有2人參與
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單酶切切完后為什么載體比空載體還要小呢？求助左邊兩個(gè)是空質(zhì)粒，右邊是單酶切 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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木蟲 (正式寫手)
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2樓2017-07-14 06:02:05
fengshen2005
銀蟲 (正式寫手)
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3樓2017-07-14 06:36:52
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你質(zhì)粒大小是多少？講道理單酶切后跑膠大小和質(zhì)粒真實(shí)大小一致 如果你這個(gè)單酶切的大小和原質(zhì)粒大小一至 就說明你空質(zhì)粒提的有問題 如果單酶切和原質(zhì)粒大小不一致說明酶切有問題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2017-07-14 09:11:46
5樓2017-07-14 09:12:05
賤賤JMe
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不要糾結(jié)這個(gè)結(jié)果了，好好檢查你的方案和數(shù)據(jù)，此次實(shí)驗(yàn)肯定是存在問題的。 如果使用相同的酶切位點(diǎn)插入目的片段，那么在酶切回收載體時(shí)就可以看到單切之后載體的大小。然后插入片段之后又用這個(gè)酶單切，可能因?yàn)椴迦氲年P(guān)系引入新的位點(diǎn)，造成雙酶切而且片段大小無法分辨開來重合在一起顯示為一條帶。 重新選擇單酶切位點(diǎn)，酶切驗(yàn)證構(gòu)建好的質(zhì)�？唇Y(jié)果是否符合預(yù)期結(jié)果。 |
6樓2017-07-14 10:47:10
18693104857
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7樓2017-07-16 07:51:50
18693104857
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8樓2017-07-16 07:54:49
18693104857
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- 專業(yè): 呼吸調(diào)控異常
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我把空載體也用單酶切和雙酶切都切了，跑出來大小跟空載體一樣，說明載體上沒有這兩個(gè)酶的酶切位點(diǎn)�，F(xiàn)在重組載體單酶切后變小了，重組載體雙酶切后目的基因在目的位置，就是切開的質(zhì)粒不在相應(yīng)的位置上，分子量變小了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2017-07-16 07:57:37
10樓2017-07-16 08:58:57
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