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badronger新蟲 (初入文壇)
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[求助]
利用Crispr技術敲除鏈霉菌種屬的基因 已有3人參與
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利用Crispr技術敲除鏈霉菌種屬的基因，但在第一步就花了兩個月都沒做出來，急！��！ 我是直接用的別人構建好的質粒，這個質粒上原本就是20nt，我得要把這20nt置換下來，連接上我自己的20nt，我是用酶切的方式（此質粒文獻中的方法），但是這個酶是BaeI酶，這個酶比較特殊而且酶切效率不是很高。目前遇到的最大問題是，我的負對照（酶切后的質粒做連接轉化，沒有我的20nt）和我的實i驗組長出的板子單克隆很奇怪，是那種像針尖一樣，硬的，透明的很小的單克隆，很難挑。但是也能搖出菌，可是經測序是原始質粒。 我目前最大困惑： （1）就是為什么負對照和實驗組（有我自己設計的20nt）長出的單克隆形態(tài)與原始質粒的單克�。ㄕ５拇髼U菌單克隆形態(tài)）非常不一致。 （2）雖說有可能是酶切效率不高，導致挑了很多單克隆都不是。但是我沒切時間有8小時，我感覺足夠長了，是不是BaeI這個酶太特別了 希望大神能幫忙一下，快三個了，沒一點進展，老師逼得急啊  |
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kangaroo0513
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2樓2017-07-22 21:12:13
kangaroo0513
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