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tongyue1992新蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA濃度太低，求助 已有3人參與
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最近剛開始研究生實(shí)驗(yàn)，買了試劑盒提取RNA，按照說(shuō)明書進(jìn)行，然后測(cè)了一下濃度，太低，50左右。不知道哪里出了問(wèn)題，希望大家能幫忙分析一下或是和我說(shuō)一說(shuō)提取RNA的注意事項(xiàng)！謝謝大家！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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高chengbin
新蟲 (初入文壇)
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5樓2017-08-15 20:07:54
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tongyue1992: 金幣+2, ★★★很有幫助 2017-08-03 22:28:09
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tongyue1992: 金幣+2, ★★★很有幫助 2017-08-03 22:28:09
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注意事項(xiàng)： 1.從少量樣品（1-10mg組織或102-104細(xì)胞）中提取RNA時(shí)可加入少許糖原以促進(jìn)RNA沉淀。例如加800ml TRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原會(huì)與RNA一同沉淀出來(lái)，糖原濃度不高于4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反應(yīng)。 2．勻漿后加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個(gè)月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。 3．分層和 RNA沉淀時(shí)也可使用臺(tái)式離心機(jī)，2600×g離心30-60分鐘。 預(yù)期產(chǎn)量：1mg組織或1×106細(xì)胞提取RNA分別為： 肝和脾 6-10μg ,腎3-4μg ,骨骼肌和腦組織1-1.5μg ,胎盤1-4μg ,上皮細(xì)胞8-15μg ,成纖維細(xì)胞5-7μg 。 常見問(wèn)題分析： 得率低：A.樣品裂解或勻漿處理不徹底 B．RNA沉淀未完全溶解 A260/A280<1.65 ：A.檢測(cè)吸光度時(shí)，RNA樣品沒(méi)有溶于水，而溶于了TE中。低離子濃度和低pH值條件下A280值偏高 B．樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少 C．勻漿樣品時(shí)未在室溫放置5分鐘 D．吸取水相時(shí)混入了有機(jī)相 E．RNA沉淀未完全溶解。 |
2樓2017-08-03 22:19:25
tongyue1992
新蟲 (初入文壇)
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我提取的是棗的果實(shí)，植物RNA提取，大家有什么經(jīng)驗(yàn)或是建議嗎？好難過(guò)，嘗試了3個(gè)樣了，濃度都是很低！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-08-03 22:29:29
zhouxfd
木蟲 (正式寫手)
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4樓2017-08-03 23:58:28
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