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王木木2016新蟲 (小有名氣)
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[求助]
純化后的蛋白電泳不出目的條帶 已有1人參與
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我的蛋白是可溶性蛋白，純化后洗脫液能看到白色沉淀，之前電泳出目的條帶了，但最近電泳不出來目的條帶了，請問是什么原因��？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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1: 參考抗體說明書，準備陽性對照，剛買的抗體一定要做這一步，排除抗體質(zhì)量的問題。 2:在抗體沒有失效的情況下，檢測下面幾個問題 a：細胞一般是不會出神馬問題的，但是裂解液這個東西還是需要考慮的。遇到一個很經(jīng)典的事情，用得公司買的RIPA裂解細胞，beta-actin的條帶好看的不得了，目的條帶就是木有，后來發(fā)現(xiàn)就是裂解液出問題的，換了裂解液立馬正常了。 b：樣品木有問題了，遇到不好用得抗體，加大上樣量，有助于條帶的出現(xiàn)。 根據(jù)目的蛋白選擇合適的膠的濃度，以及轉(zhuǎn)膜的時間（這個還是很重要，轉(zhuǎn)膜不充分，轉(zhuǎn)膜過了都會導致目的條帶出不來）。 一抗最好4°過夜。 洗膜的緩沖液的PH還是很重要，要調(diào)準。 后面二抗應該不會出神馬問題的，但是還是需要考慮的。 曝光延長時間。 每一步出錯都有可能導致條帶出不來的。你沒有寫具體的步驟，上面只是講了下我想到的要注意的幾方面的問題，希望對你有幫助。 |
2樓2017-08-13 15:00:12
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