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memo989鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
重疊延伸pcr的條件問(wèn)題 已有1人參與
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希望將兩個(gè)片段融合為一個(gè)片段，已擴(kuò)增出單獨(dú)的兩個(gè)片段（兩個(gè)片段有互補(bǔ)部分，約70bp）我的問(wèn)題是，下一步如何融合？條件是什么？加的片段濃度要求是多少？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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2樓2017-08-14 19:25:20
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-08-15 07:04:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-08-15 07:04:25
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方法可參考Nat Protoc. 2006;1(2):791-7. PCR-based accurate synthesis of long DNA sequences. 文章里用overlap pcr將小片段組裝成較大的片段。 個(gè)人感覺(jué)片段割膠回收后，在體系里每個(gè)片段加20納克就足夠了。 片段之間的overlap至少要有20bp，在50-55度退火。 |
3樓2017-08-14 21:56:45
memo989
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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4樓2017-08-15 10:36:24
memo989
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5樓2017-08-15 10:58:31
memo989
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6樓2017-08-15 11:01:49
ladejueshi
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7樓2017-08-15 11:11:09
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8樓2017-08-18 12:15:40
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9樓2017-08-20 19:27:38
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