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鼠尾基因型鑒定，總P不出目的條帶。
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我們定了一批KO小鼠，做基因型鑒定�？偸褂煤蠸DS的lysis buffer 以及家蛋白酶K 裂解鼠尾，然后用乙醇沉淀基因組DNA�；蚪M我跑了電泳，有蛋白殘留，在孔里，但是基因組DNA確實(shí)有條帶。 后面進(jìn)行PCR，有一個(gè)目的條帶3.9k.始終p.不出來(lái)，其他兩個(gè)條帶1K和0.5k都可以。 改變了條件，使用高保真都沒(méi)出現(xiàn)過(guò)。 而且奇怪的是的，在WT本不該有1K，但是，有了。 現(xiàn)在人沒(méi)在實(shí)驗(yàn)室，我過(guò)一會(huì)發(fā)個(gè)圖。 求大神解釋原因可能在哪？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2017-09-09 08:38:53
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確實(shí)不好p，但是，公司那邊做出來(lái)沒(méi)問(wèn)題，我們就是重復(fù)不出來(lái)。給另一個(gè)老師做的鑒定，他們的很短，很好p，所以應(yīng)該排除操作原因。條件也換過(guò)很多。延伸到5分鐘都沒(méi)有，高保真也沒(méi)有。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-09-09 08:45:14
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-09-09 19:26:47
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-09-09 19:26:47
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長(zhǎng)的確實(shí)不好P，可能酶不一樣，也有可能模板提的質(zhì)量不怎么好，原因很多。建議你設(shè)計(jì)一對(duì)短的引物試試。你們敲除的前段應(yīng)該不長(zhǎng)吧，為什么要用這么長(zhǎng)的引物堅(jiān)定呢？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-09-09 08:47:48
bsese
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7樓2017-09-09 09:01:44
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