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Klutzl鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
小喵
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[求助]
求助，大鼠皮膚石蠟切片
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最近在做SD大鼠皮膚和肌肉的石蠟切片，實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1、組織于40g/L多聚甲醛中固定過(guò)夜后，流水沖組織以去除固定液。 2、乙醇梯度脫水：70%，80%，90%乙醇脫水30min，95%，100%乙醇脫水20min，各兩次； 3、透明：二甲苯：乙醇=1:1透明15min，二甲苯I透明15min，二甲苯II透明15min； 4、浸蠟：二甲苯：石蠟=1:1浸蠟20min，石蠟I浸蠟1h，石蠟II浸蠟1h，石蠟III浸蠟1h； 5、包埋后于4度冰箱保存 6、切片 出現(xiàn)的問(wèn)題有： 1、在進(jìn)行切片的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)皮膚組織要么會(huì)碎，要么組織部分是空的，偶爾有皮膚組織是完整的，但是在水中鋪展的時(shí)候發(fā)現(xiàn)皮膚組織會(huì)散開(kāi)，想知道是什么原因造成的。 2、如何判斷皮膚組織已經(jīng)完全透明。 3、皮膚組織固定多長(zhǎng)時(shí)間才比較合適 4、肌肉組織和皮膚組織的包埋步驟是一樣的，但是肌肉組織的切片是沒(méi)有問(wèn)題，不知道是哪個(gè)步驟造成皮膚組織會(huì)破碎。  |
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可能是沒(méi)固定好 延長(zhǎng)固定時(shí)間，另外，你的浸蠟時(shí)間太長(zhǎng)了，一般浸蠟，兩級(jí)就好，組織浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，切片時(shí)候組織容易碎，浸蠟一級(jí)半小時(shí)，二級(jí)一個(gè)半小時(shí)你可以試試，我沒(méi)切過(guò)皮膚，切的內(nèi)臟 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2017-09-15 18:29:40
Klutzl
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
小喵
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皮膚固定時(shí)間不能超過(guò)24h，不然組織會(huì)變脆，按照這個(gè)方案，我之前做出來(lái)一次結(jié)果，可是后面幾次就是到切片這塊就不行了�，F(xiàn)在也不知道是哪個(gè)步驟出問(wèn)題…… 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-09-15 19:52:49
東嵐實(shí)驗(yàn)
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4樓2017-10-18 13:36:48
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5樓2017-10-20 14:50:50
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6樓2017-12-02 17:02:00
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