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血漿游離DNA提取試劑盒
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【產(chǎn)品名稱】 血漿游離DNA提取試劑盒 貨號：KR008K/50次 【產(chǎn)品簡介】 本試劑盒可快速、高效地提取游離DNA（cfDNA），適用樣本包括含有EDTA抗凝劑的人類及哺乳動物血漿、血清和唾液等。 試劑盒中的離心吸附柱采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA， 可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及其他有機化合物。提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可直接應用于PCR、Q-PCR、測序等下游實驗。 【產(chǎn)品內(nèi)容】 產(chǎn)品組成 規(guī)格 說明 保存條件 裂解液 CBL 55 mL 室溫 緩沖液 DL 60 mL 使用前加入40mL異丙醇 洗滌液CWB1 12 mL 使用前加入18mL無水乙醇 洗滌液WB2 8 mL 使用前加入24 mL無水乙醇 洗脫液 10mM Tris-HCl pH8.0 6 mL 50% 甘油 10 mL DNA吸附柱 50支 收集管2-mL 50支 無核酸酶污染離心管 1.5-mL 50支 Proteinase K 2瓶 每瓶在使用前加入4mL 50% 甘油，于-20℃保存 4℃ *已充分考慮到每次吸取試劑時的損耗，試劑有效期為12個月。 【使用前注意事項】 1. 試劑盒中Proteinase K為凍干粉，于4℃保存；每瓶使用前加入4mL 50%甘油后于-20℃保存。 2. 第一次使用前應在緩沖液DL中加入40 mL異丙醇。 3. 第一次使用前應在洗滌液CWB1中加入18 mL無水乙醇。 4. 第一次使用前應在洗滌液WB2中加入24 mL無水乙醇。 5. 裂解液CBL在室溫較低時可能出現(xiàn)結(jié)晶，可于37℃水浴溶解。 【操作步驟】 1. 取1mL血漿加入到10mL（或15mL）離心管中（自備），加入150 μL Proteinase K和1mL 裂解液CBL，渦旋震蕩混勻。 注意：此步驟必須確�；旌暇鶆颉� 2. 60℃溫浴40 min。 3. 在離心管中加入1.8mL 緩沖液DL，渦旋震蕩混勻。 注意：初次使用前需向緩沖液DL瓶中加入40 mL的異丙醇，并充分震蕩混勻。 4. 將DNA吸附柱置于2-mL收集管中，將上述溶液全部轉(zhuǎn)移到DNA吸附柱中（每次850μL），13,000 rpm離心1 min，棄濾液。 注意：DNA吸附柱的最大容量是850 μL，請勿超出最大容量�？偣残桦x心5次，1-4次可以在離心機轉(zhuǎn)速達到10,000rpm后停止（約離心40s），最后一次離心時務(wù)必于13,000 rpm離心1 min。有條件的實驗室可使用抽濾法過柱（需自備）。 5. 向DNA吸附柱中加入洗滌液CWB1 500 μL，13,000 rpm離心1 min，棄濾液。 注意：初次使用前需向洗滌液CWB1瓶中加入18 mL的無水乙醇，并充分震蕩混勻。 6. 將DNA吸附柱重新放回2 mL收集管中，加入500 μL洗滌液WB2，13,000 rpm離心1 min，棄濾液。 注意：初次使用前需向洗滌液WB2瓶中加入24 mL的無水乙醇，并充分震蕩混勻。 7. 將DNA吸附柱置于新的1.5-mL無核酸酶污染的離心管中（本試劑盒提供），于室溫靜置或超凈工作臺風干3-5 min，以徹底揮發(fā)殘余的乙醇。 注意：殘留的乙醇可能會影響后續(xù)的PCR等實驗。 8. 向吸附柱柱膜中央上方小心加入20-30 μL 洗脫液10mM Tris-HCl pH8.0 （此步驟請謹慎操作，槍頭請勿接觸柱膜)，室溫靜置1 min，13,000 rpm 離心1 min。洗脫液即為DNA溶液。 注意：最小洗脫體積為10μL；根據(jù)后續(xù)實驗需求，此步驟也可以用無核酸酶污染的純水洗脫；洗脫液經(jīng)65℃溫浴后可提高洗脫效率。 |
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2017-09-18 11:52:18, 222.49 K
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