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餓的神啊新蟲 (著名寫手)
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hairpin for VIGS 已有1人參與
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1、像這種反向互補序列是直接送公司合成的，還是設計一半的引物，然后讓引物退火成雙鏈？ 2、如果是直接合成的，插入載體種還要同時做正、反向插入嗎？ 以下是原文描述，我不是很懂，求解。 The oligonucleotides PDS-54s and PDS-54as, corresponding to nt 1176–1220 of the Arabidopsis PDS cds, were hybridized to each other and cloned into the SnaBI site of E17-S in the sense or antisense orientation to generate E17-PDS-s and E17-PDS- as, respectively. The oligonucleotides PDS-IR37 and PDS-IR41, corresponding to nt 1176–1212 of the Arabidopsis PDS cds, were hybridized to each other and cloned into the SnaBI site of E17-S to generate E17-PDS-IR. The other VIGS vector constructs (pTY-PDS48-IR, pTY-PDS52-IR, pTY-PDS56-IR, pTY-PDS60-IR, pTY-PDS64-IR, pTY-PDS70-IR, pTYPDS76-IR, pTY-PDS2-IR and pTY-LFY-IR) were obtained by cloning the self-hybridized palindromic oligonucleotides PDS48, PDS52, PDS56, PDS60, PDS64, PDS70, PDS76, PDS2-IR and LFY-IR (corresponding to nt 911–949 of the LFY cds), respectively, into the SnaBI site of pTY-S. This small size therefore allows the introduction of foreign sequences in the viral genome by direct cloning of doublestranded synthetic oligonucleotides. To target a specific gene, we therefore advise that a self-hybridizing palindromic oligonucleotide of 76–80 nt, identical to the target gene sequence, be inserted into the SnaB1 site of pTY-S, so that hairpin RNAs bearing a stem of 36–38 nt and a 4 nt loop could be generated. hp.png |
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