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glzeng金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】凝膠過濾中的問題
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各位蟲子，大家好，我現(xiàn)在在做一個(gè)分子量為8-9KDa的產(chǎn)品，但是中間夾雜了一些分子量為200-600Da的小分子，用透析的方法也試過，但是總是掌握不好透析的時(shí)間，每次濃縮之后去檢測都發(fā)現(xiàn)還有一小部分沒透析出去，再說如果以后放大的話用透析也不方便，挺頭疼的。后來我用sephadex G50（分離極限為20KDa左右）做填料進(jìn)行凝膠過濾，可是總是分不開，這是怎么回事，是我選擇的凝膠不對(duì)么？我用G25也試過，好像也是分不開，這是怎么回事？另外用凝膠過濾的時(shí)候前30分鐘出來的是分子量大于20KDa的組分嗎？這個(gè)我也一直沒搞明白，只是發(fā)現(xiàn)這部分的組分有些渾濁，感覺是溶解性不太好的組分。 [ Last edited by zhangwj on 2009-2-19 at 23:33 ] |
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木蟲 (小有名氣)
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樓主可否把問題說的更明白些？比如目標(biāo)產(chǎn)品的理化性質(zhì)（可溶，難溶？蛋白？高分子？），小分子的來源及性質(zhì)（制備產(chǎn)品的原料還是副產(chǎn)物或者？） 根據(jù)你的問題，我覺得還是比較正常的 透析是一種傳統(tǒng)而溫和的分離純化方式，最適合于生物活性高而不穩(wěn)定大分子（蛋白，抗體等）的純化，由于其溫和，因而很難把雜質(zhì)除干凈，這是因?yàn)橥肝鍪腔谧杂蓴U(kuò)散平衡原理，而小分子通常由于和大分子之間有一定的作用力（靜電引力，非特異性吸附，疏水締合等），在這種自由擴(kuò)散下很難完全除凈 過凝膠柱同樣存在著上述的問題，即二者的結(jié)合力使得在過柱時(shí)很難分開，因而有部分小分子會(huì)隨著大分子同時(shí)出來，理論上你的目標(biāo)產(chǎn)品和雜質(zhì)是很適合用G50來分的，但實(shí)際上是不可能完全純化的。 為此，在下有一些不知是否管用的建議供你參考： 1. 如果小分子是弱酸弱堿類物質(zhì)，而你的目標(biāo)物在一定的pH范圍內(nèi)又很穩(wěn)定，建議你調(diào)節(jié)pH使得小分子呈解離態(tài)，并適當(dāng)增加透析液的鹽濃度，從而較好的除去雜質(zhì)（若之后還想除去鹽離子，則可用純水繼續(xù)透析） 2. 如果樣品溶解度較好，盡量在上樣時(shí)濃度高些，這樣拖尾情況可改善 3.如果雜質(zhì)溶解度不好，在不影響產(chǎn)品性質(zhì)前提下，調(diào)整透析液或洗脫液的性質(zhì)，使雜質(zhì)盡量可溶，從而除去 4.樓主的樣品純化后作何用？如果對(duì)雜質(zhì)限量沒有太高要求，可以適當(dāng)模糊化，先進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn) 獻(xiàn)丑了，哈哈 |
2樓2009-02-21 16:05:13
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