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葉老師講分析系列------第一彈：HPLC分析方法建立概論
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現(xiàn)今，隨著人們對(duì)藥品安全問(wèn)題的關(guān)注與日俱增，HPLC這一分離分析技術(shù)也得到了更加廣闊的運(yùn)用。 如何確定特定樣品的最佳分離條件，只有通過(guò)實(shí)驗(yàn)才能得到。若從比較好的初始條件開(kāi)始，往往可能在較短的時(shí)間內(nèi)就得到滿(mǎn)意的結(jié)果，做到事半功倍。反之，若隨意實(shí)驗(yàn)，則只能事倍功半。 現(xiàn)今，人們對(duì)色譜分離技術(shù)已經(jīng)有了非常深入的認(rèn)識(shí)。一般的色譜工作者都知道隨著實(shí)驗(yàn)條件的不同樣品的分離會(huì)如何改變。對(duì)于大多數(shù)的HPLC方法建立，只要有足夠多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，都能最終得到一個(gè)比較滿(mǎn)意的結(jié)果。但是，對(duì)于時(shí)間就是金錢(qián)，項(xiàng)目進(jìn)度必須保證的我們來(lái)說(shuō)，基于色譜分離基礎(chǔ)知識(shí)體系的良好的分析方法建立模式，能幫助我們更加高效，更加完美地解決工作中所碰到的色譜分離問(wèn)題。良好的分析方法建立模式旨在于僅用幾次必要的實(shí)驗(yàn)，即可得到理想的最終結(jié)果。即我們不希望做無(wú)用功，希望每一次的實(shí)驗(yàn)對(duì)最終的結(jié)果都有幫助。 通常，對(duì)于每一次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果都需進(jìn)行評(píng)價(jià)，然后根據(jù)評(píng)價(jià)的結(jié)果再往下進(jìn)行。 HPLC方法建立的步驟：  在開(kāi)始方法建立前，我們應(yīng)該檢查自己對(duì)樣品的了解程度，明確分離的目的。 這里包括： 1. 所需分離組分內(nèi)所含化合物的數(shù)目； 2. 各個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)（官能團(tuán)）； 3. 化合物的分子量； 4. 各個(gè)化合物的pKa值； 5. 各個(gè)化合物的UV光譜圖（VWD檢測(cè)器是最常使用的檢測(cè)器，UV光譜涉及到該樣品在這個(gè)色譜條件下的吸收值） 6. 各個(gè)化合物在樣品中的濃度范圍，以及樣品的溶解度。 上述物理化學(xué)性質(zhì)能為選擇色譜分離的最佳初始條件提供非常有價(jià)值的線(xiàn)索。 根據(jù)已知的樣品信息，HPLC分析方法的建立目前有兩種不甚相同的模式。一種模式稱(chēng)為“理論型，”是依據(jù)樣品的“物理化學(xué)性質(zhì)”選擇最佳初始條件。而另一種模式稱(chēng)為“經(jīng)驗(yàn)型”，則是直接開(kāi)始色譜分離（做實(shí)驗(yàn)），而對(duì)樣品的性質(zhì)不大注意。初始條件一旦確定，后續(xù)則需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，直至得到比較理想的分析方法。 每周不定期更新，歡迎大家一起來(lái)探討，也可以關(guān)注微信公眾號(hào)，在公眾號(hào)中交流經(jīng)驗(yàn)  |
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