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吉利畫眉鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
GC-MS測(cè)定水稻葉片代謝物的前處理
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各位蟲友，大家好 本人目前在提取測(cè)定水稻葉片的氨基酸、糖類等代謝物，是新手。經(jīng)過(guò)查文獻(xiàn)后，提取方法為提取液（甲醇：氯仿：去離子水 = 2.5：1：1）70℃水浴15min，用GC-MS檢測(cè)不到東西或者只能檢測(cè)到吡啶。現(xiàn)在將具體步驟列下來(lái)，請(qǐng)問(wèn)是否哪些步驟有問(wèn)題或有細(xì)節(jié)沒(méi)有注意到。我自己在提取過(guò)程中遇到的疑惑附在最后，求解答，謝謝！ 提取步驟： 1 將植物鮮樣用液氮研磨成粉末，稱取0.1g粉末于2ml離心管中。 2 向離心管中加入1.5ml提取液（甲醇：氯仿：去離子水 = 2.5：1：1）。 3 向離心管中加入50μL的核糖醇（0.2g/L），按上蓋子。 4 離心管渦旋10s。 5 離心管在70℃水浴15min。 6 離心管在4℃下，12000g離心10min。 7 取200μL的上清液于液譜瓶中，氮吹干。 8 向液譜瓶中加入80μL的甲氧胺鹽酸鹽（20mg/ml，溶于吡啶），37℃恒溫箱孵育2h。 9 向液譜瓶中加入50μL的MSTFA，37℃恒溫箱孵育2h。 10 向液譜瓶中加入870μL的甲醇溶液，使得溶液體積達(dá)到1ml，氣相質(zhì)譜待測(cè)。 問(wèn)題 1 70℃水浴時(shí)離心管是否蓋蓋子，如果蓋蓋子的話水浴時(shí)會(huì)崩開，不蓋的話溶液會(huì)揮發(fā)。 2 在經(jīng)過(guò)甲氧胺鹽酸鹽和MSTFA孵育后，液譜瓶中溶液只有130微升，是否需要加入甲醇使得溶液體積高一點(diǎn)（加甲醇這一步是小老師建議的，在文獻(xiàn)中沒(méi)有看到過(guò)）？ |
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吉利畫眉(晉鵬代發(fā)): 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流~歡迎常來(lái)農(nóng)林版交流經(jīng)驗(yàn)~ 2017-10-28 11:31:48
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我們提取蘋果葉片揮發(fā)性物質(zhì)是避免高溫的，我們是用超聲萃取，20攝氏度，半個(gè)小時(shí)。還有你的那一步氮?dú)獯蹈墒遣皇且彩菗]發(fā)性物質(zhì)減少的原因之一。我也是剛剛開始做，說(shuō)錯(cuò)了不要介意哦。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
吉利畫眉2樓2017-10-27 17:32:09
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4樓2017-10-27 17:54:44
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