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清明河上新蟲 (小有名氣)
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[求助]
平板計數(shù)細(xì)菌各梯度之間不成比例？ 已有3人參與
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請教各位大神，最近做細(xì)菌平板計數(shù)實驗，細(xì)菌長到OD600=0.6，用PBS緩沖液10倍系列梯度稀釋，每個平板涂100μL，細(xì)菌生長情況如下： 10^-9：20,22,15,18,26,14,15,18 10^-8：56,62,65,62,69,67,64,89 10^-7：197,217,200,165,184,256,177,155 各平行重復(fù)性還可以接受，但是相鄰的兩個梯度之間的菌落數(shù)形不成10倍關(guān)系。 這是什么原因?qū)е碌模窟@種結(jié)果可以采用嗎？應(yīng)該怎樣處理，計算菌的濃度（CFU/mL）?該如何解決這個問題？ |
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清明河上
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5樓2017-11-22 09:54:19
myindexaust
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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2樓2017-11-21 21:26:36
jinpeng1980
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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選取30－300間的稀釋度計數(shù)并乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)再乘以10為每mL樣品原液中的活菌總數(shù) 如若兩個稀釋度均在30－300 則以其各自稀釋度下計算的菌落數(shù)相除 比值小于2則 取兩稀釋度的平均值 如若大于2，則取稀釋度小的那個計算菌落數(shù)。 同一稀釋度下的3個平板取3個平板的平均值。 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù),其他平板可 記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)再乘10進(jìn)行計算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)再乘10進(jìn)行計算。 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)再乘10進(jìn)行計算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于 300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)再乘10進(jìn)行計算 |
3樓2017-11-22 08:15:31
snoopytbw
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4樓2017-11-22 08:47:13
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