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清明河上新蟲 (小有名氣)
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[求助]
平板計數(shù)細菌各梯度之間不成比例? 已有3人參與
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請教各位大神,最近做細菌平板計數(shù)實驗,細菌長到OD600=0.6,用PBS緩沖液10倍系列梯度稀釋,每個平板涂100μL,細菌生長情況如下: 10^-9:20,22,15,18,26,14,15,18 10^-8:56,62,65,62,69,67,64,89 10^-7:197,217,200,165,184,256,177,155 各平行重復(fù)性還可以接受,但是相鄰的兩個梯度之間的菌落數(shù)形不成10倍關(guān)系。 這是什么原因?qū)е碌模窟@種結(jié)果可以采用嗎?應(yīng)該怎樣處理,計算菌的濃度(CFU/mL)?該如何解決這個問題? |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
捐助貴賓 (小有名氣)
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選取30-300間的稀釋度計數(shù)并乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)再乘以10為每mL樣品原液中的活菌總數(shù) 如若兩個稀釋度均在30-300 則以其各自稀釋度下計算的菌落數(shù)相除 比值小于2則 取兩稀釋度的平均值 如若大于2,則取稀釋度小的那個計算菌落數(shù)。 同一稀釋度下的3個平板取3個平板的平均值。 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù),其他平板可 記錄為多不可計,結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)再乘10進行計算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)再乘10進行計算。 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)再乘10進行計算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于 300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)再乘10進行計算 |
榮譽版主 (著名寫手)
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