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Nemo
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HPLC連續(xù)進(jìn)樣同一樣品檢測(cè)，峰面積增大 已有1人參與
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各位朋友好，我用安捷倫1260液相分離一個(gè)多肽樣品，但是我自己摸索的方法現(xiàn)在出現(xiàn)一個(gè)問(wèn)題就是同一樣品連續(xù)進(jìn)樣主峰的峰面積會(huì)慢慢增大，第一針?lè)迕娣e16500，第二針就是16580，第三針16670，每次進(jìn)樣峰面積都增加50到100不等，無(wú)法做重復(fù)性實(shí)驗(yàn)了。 我用的流動(dòng)相是A：95%水+5%ACN+0.1%TFA；流動(dòng)相B：90%ACN+10%水+0.1%TFA，柱子用的是C18的柱子，我是從0min開(kāi)始到30min用梯度洗脫，后面用流動(dòng)相B沖洗10min，然后回到初始條件平衡10min，然后 開(kāi)始走下一針樣品； 出峰的時(shí)間沒(méi)有太大變化，在0.02min時(shí)間內(nèi)上下浮動(dòng)； 我的樣品是用10%ACN溶解的，進(jìn)樣器的托盤(pán)控制溫度在4℃，應(yīng)該不是溶劑揮發(fā)造成進(jìn)樣濃度增加導(dǎo)致峰面積變大； 一開(kāi)始以為是柱溫的問(wèn)題呢，后來(lái)試過(guò)了20，30,40,50度這幾個(gè)發(fā)現(xiàn)都一樣，還是不斷增大； 儀器沒(méi)問(wèn)題，因?yàn)榍懊嬗貌煌姆椒ㄗ咂渌臉悠返臅r(shí)候重復(fù)性是很好的； 我在這個(gè)條件的基礎(chǔ)上增大梯度的陡度或者開(kāi)始進(jìn)樣的時(shí)候增加一個(gè)等度平衡體系發(fā)現(xiàn)都沒(méi)有什么用，峰面積依然逐漸增大； 我開(kāi)始以為柱子的問(wèn)題，然后換成C8的柱子，用這個(gè)方法走同樣的樣品依然是這樣的情況； 請(qǐng)教一下有經(jīng)驗(yàn)的朋友這是不是我的洗脫條件的問(wèn)題，是否需要更換流動(dòng)相或者說(shuō)更換梯度的比例，如果是的話(huà)應(yīng)該從哪兒來(lái)入手找到問(wèn)題的所在，謝謝！ 如果發(fā)的版塊不對(duì)的話(huà)請(qǐng)管理員提醒，謝謝！ |
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