 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1163 | 回復: 5 | ||
yuevis銅蟲 (小有名氣)
|
[求助]
PCR出不來目的條帶
|
|
我想overlap pcr把上下同源臂和目的基因連在一起，從基提取的細菌基因組上擴增上下同源臂，沒有目的條帶，有很多比目的條帶小或者接近的雜帶，請問這是怎么回事啊，很急啊，我的引物是這樣的 F1:AACTTGTGACGGAGGCG R1:CTGACGTATAGATGACATAAGCCAGATCTGTCGCTTCGGTGC F2:GCTTGCGAGAGGTTACCTGAACCGGCCGGAGCTGAC R2:TTCCAGCGGAGTCCGA 重疊區(qū)25bp左右，primer給的Tm是52和54左右，合成單上是54和56度左右，我試了退火溫度48，50，52，54，56效果都不好，雜帶很多，目的條帶有的沒有，有的很淡。我之前想的是就算特異性不好，之后膠收就行了，現(xiàn)在是連條帶都沒有，用的是fastpfu酶，做的10微升體系。求教各位啊! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有213人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
wareer
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2639.5
- 紅花: 2
- 帖子: 203
- 在線: 148小時
- 蟲號: 82254
- 注冊: 2005-07-24
- 專業(yè): 植物遺傳學
2樓2017-11-30 06:33:35
yuevis
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6.3
- 散金: 102
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 281
- 在線: 74小時
- 蟲號: 4994662
- 注冊: 2016-09-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 系統(tǒng)生物學
|
剛開始做，很多不懂，我想的是那10微升試條件的，體系會有很大影響嗎?還有出現(xiàn)很多雜帶是不是說明提取的基因組和體系是沒問題的?一般用什么酶?實驗室只有fastpfu酶 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-11-30 07:05:56
wareer
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2639.5
- 紅花: 2
- 帖子: 203
- 在線: 148小時
- 蟲號: 82254
- 注冊: 2005-07-24
- 專業(yè): 植物遺傳學
|
你這應(yīng)該是要做載體的吧?用高保真的酶，引物設(shè)計可以用http://www.clontech.com/上面的infusion工具設(shè)計，我試過不錯的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-11-30 12:28:48
小潔癖0802
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 28.5
- 帖子: 5
- 在線: 55分鐘
- 蟲號: 7263301
- 注冊: 2017-10-05
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
5樓2017-12-02 16:29:20
yuevis
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6.3
- 散金: 102
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 281
- 在線: 74小時
- 蟲號: 4994662
- 注冊: 2016-09-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 系統(tǒng)生物學
6樓2017-12-02 18:37:56
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 yuevis 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +11 | 梨花珞晚風 2026-03-17 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +4 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +9 | 煙火先于春 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0703化學297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料工程（專）一志愿985 初試335求調(diào)劑 +3 | hiloiy 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二 +3 | z1z2z3879 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計算機技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中南大學化學學碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 295復試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學求調(diào)劑 +4 | Stella_Yao 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08工學調(diào)劑 +5 | 用戶573181 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|