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實(shí)驗(yàn)室410金蟲 (正式寫手)
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[求助]
G418篩選穩(wěn)定細(xì)胞系
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| 本人最近正在篩選穩(wěn)定細(xì)胞系，是neo抗性的，在293FT、KP、LCL細(xì)胞中篩選，G418濃度多少合適？我第一次是400、800、1200ug/mL，3天沒有死亡；第二次是1500、2000、2500ug/mL，第二天還是沒有明顯死亡。大家都有什么經(jīng)驗(yàn)，探討一下。 |
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memorize1991
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G418我就用的1x PBS配的，密度的話，我是在24孔板中做的 濃度梯度，種2萬個(gè)細(xì)胞每孔。一天后就開始了加G418。 現(xiàn)在都是帶puro的載體，所以都用puro篩，一段時(shí)間后過流式細(xì)胞儀。既然沒把你細(xì)胞篩下去，也許是你一轉(zhuǎn)染效率高，死亡細(xì)胞少，你可以提個(gè)基因組檢測一下你的基因插入進(jìn)去沒～～也可以做個(gè)QRT看看表達(dá)量～～試一試，不一定是你的篩選藥物的問題。 例如我一種普通的細(xì)胞，在puro濃度為1.5ug/ml puro篩選，但我轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用3ug的篩選～～你得先預(yù)實(shí)驗(yàn)確定一下合適的篩選濃度～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-12-28 14:35:56
memorize1991
木蟲 (正式寫手)
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我用G418篩的時(shí)候1mg/ml就夠了，不過后來重建的穩(wěn)轉(zhuǎn)系用的puro。篩選濃度和你用的載體還有細(xì)胞有關(guān)吧，你可以查一下，我記得查過有書上給過G418在不同細(xì)胞中篩選濃度的大概范圍。你這么高的濃度都不死有點(diǎn)兒不正常，可以等2天再看看～是否可能你的G418配的有問題？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-12-28 12:35:48
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3樓2017-12-28 13:11:01
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4樓2017-12-28 13:12:17
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