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1768624049新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
PCR擴(kuò)增 已有2人參與
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PCR擴(kuò)增的片段不對(duì)，但引物設(shè)計(jì)沒(méi)問(wèn)題，我該怎么辦啊， 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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2樓2017-12-30 16:09:21
1768624049
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3樓2017-12-30 23:26:33
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我認(rèn)為你的引物設(shè)計(jì)可能有問(wèn)題。提幾個(gè)建議，參考一下。 1、設(shè)計(jì)模板的問(wèn)題。是真核生物還是原核生物，用的是全基因組序列還是cds序列設(shè)計(jì)，是否跨內(nèi)含子。 2、是否能夠排除同源序列的干擾。 3、如果以上都沒(méi)有問(wèn)題，建議你進(jìn)行溫度梯度，或者更換位置重新設(shè)計(jì)引物。 4、更換pcr的buffer，有些公司的buffer為了提高擴(kuò)增效率，組分調(diào)整的比較厲害，可能會(huì)產(chǎn)生非特異產(chǎn)物。 5、用甜菜堿或者dmso |
4樓2018-01-03 10:04:22
1768624049
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5樓2018-01-03 10:30:58
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因?yàn)橐锸抢蠋熢O(shè)計(jì)的，并且看過(guò)了沒(méi)有問(wèn)題，我們實(shí)驗(yàn)室的都是PCR擴(kuò)增的片段不對(duì)或者是切不開(kāi)，我覺(jué)得可能是pfu的buffer問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2018-01-03 10:32:25
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