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LMN2012銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白洗滌過程中出現(xiàn)蛋白變性的問題 已有3人參與
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最近，利用大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)了一個(gè)50多KDa的蛋白，通過對(duì)超聲后的上清和沉淀分別進(jìn)行電泳發(fā)現(xiàn)，目標(biāo)蛋白絕大多數(shù)都在沉淀中，懷疑是包涵體形式表達(dá)，可是利用實(shí)驗(yàn)室常用的包涵體清洗液ph9.5(氯化鈉，edta，tris，triton x-100，尿素)對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌離心后，溶液中大部分沉淀結(jié)成硬塊，極少部分可以溶解，有少量蛋白存在，這樣看是蛋白在洗滌過程中變性了，可是變性的原因不清楚，請(qǐng)大神提點(diǎn)下。 @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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xiaoxiao1993
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
| 大腸桿菌被研究的很透徹，但是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)大都是胞內(nèi)表達(dá)，當(dāng)?shù)鞍追置谶^多時(shí)會(huì)形成包涵體，你的懷疑很有道理，你可以嘗試把基因轉(zhuǎn)到芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)缺陷菌株里面，表達(dá)的就成了胞外蛋白了，你也可以改造一下大腸桿菌，讓胞內(nèi)分泌到胞外，（纖維素酶作為融合蛋白在大腸桿菌中的應(yīng)用及其分泌機(jī)制的研究）你可以參考一下這篇文獻(xiàn)，總體上應(yīng)該仔細(xì)查一下你的蛋白是分泌的形式再做決定。 |
2樓2018-11-08 10:03:10
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
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3樓2018-11-08 10:25:31
4樓2018-11-21 14:34:51
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