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莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA的純化
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本人剛剛接觸DNA序列雜交,有些基礎(chǔ)知識或者說實(shí)驗(yàn)技巧想向各位前輩學(xué)習(xí): 我購買了一條單鏈DNA引物序列,包含43個堿基,其中有一部分堿基序列是互補(bǔ)配對的,也就是文獻(xiàn)中通常說的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。 問題一:對莖環(huán)結(jié)構(gòu)純化步驟有很多文獻(xiàn)說法不同,有的是95攝氏度加熱5min,冰浴冷卻;有的是95攝氏度加熱10min,每分鐘1攝氏度緩慢降至室溫。不知道到底哪一種條件對莖環(huán)結(jié)構(gòu)的純化是最佳條件。 問題二:對緩沖液中MgCl2濃度的大小,有報道2mM,5mM和10mM的,究竟什么濃度是最好的。 煩請各位不吝賜教! |
新蟲 (小有名氣)
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