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wpllrm新蟲 (初入文壇)
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[求助]
pcr時(shí) 目的條帶不亮 引物二聚體明顯為什么？ 已有2人參與
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大家好 我是實(shí)驗(yàn)新手 最近pcr產(chǎn)物電泳時(shí)發(fā)現(xiàn)目的條帶不亮 但是有 而引物二聚體很明顯 求各位大神指導(dǎo)。pcr條件預(yù)變性95度五分鐘 變性95度三十秒 退火55度三十秒 延伸72度1分鐘 總延伸72度5分鐘42個(gè)循環(huán)。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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peitaokong
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2018-01-31 11:06:44
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2018-01-31 11:06:44
| 你這個(gè)問題可以通過調(diào)節(jié)退火溫度來解決。對(duì)于樣本很多實(shí)驗(yàn)，引物拿到后，可以設(shè)置一個(gè)溫度梯度的pcr，確定這個(gè)引物的最佳退火溫度。如果是你自己設(shè)計(jì)引物的話，比Tm值低2-3度即可選擇為退火溫度，這個(gè)視具體情況而定。還可以通過二輪pcr富集你的目的條帶，總之途徑很多。你可以參考一下。 |
2樓2018-01-30 17:05:19
3樓2018-01-30 17:07:11
wpllrm
新蟲 (初入文壇)
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4樓2018-01-30 18:06:04
5樓2018-01-31 01:16:38
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